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      2. 新聞 Company News

        構建達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物研究用動物模型的一些考慮

        發布時間:2023-05-09 14:10:57 | 來源:【藥物研發團隊 2023-5-9】
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        功能性消化不良(FD)是指具有餐后飽脹不適、早飽感、上腹痛、上腹脹氣、上腹灼熱感、噯氣、惡心、嘔吐、口干、口苦中的一項或多項反復發作的癥狀,而不能用器質性、系統性或代謝性疾病等來解釋產生癥狀原因的疾病,在中醫學中屬于“痞滿”、“胃脘脹”、“積滯”范疇,西醫主要依據羅馬IV標準診斷,將其分為餐后不適和上腹痛綜合征兩個亞型。FD病因主要與遺傳和基因多態性、飲食生活方式、社會心理因素、精神情志因素、胃腸道感染等有關。目前,FD的發病機制尚未完全闡明,主要與胃腸動力障礙、內臟高敏感性、胃排空延遲、胃容受性受損、腦-腸軸及胃腸激素失調、幽門螺桿菌感染、精神心理障礙、腸道菌群失調等相關。中醫認為本病病位在胃,與肝脾關系密切,是感受外邪,飲食不節,情志失調,勞倦過度,先天稟賦不足等多種因素共同作用的結果。依據中醫理論、FD病因學和病機學理論、治療FD中醫藥的特點,構建基于病因、與臨床癥狀高度吻合、符合臨床診斷標準、病證結合、充分體現病-證-方三者關系、穩定可靠、重現性良好的FD動物模型,對于開展中醫藥治療FD的基礎研究尤為重要。

        FD往往由多個因素引發,病因病機復雜,臨床常表現為多個癥狀,且反復發作。中藥復方制劑具有多靶點、多通路、多相調節的作用,在治療FD中具有獨特優勢。達立通顆粒是在中醫藥理論指導下,針對FD的病因病機,采用病證結合、病證共治的原則組方,既疏肝理氣、解郁清熱、行氣消導,又和胃降逆、通利消滯、補虛健脾;既針對精神情志所致郁證、胃腸動力障礙所致脾胃病、飲食生活不節所致食積、耗傷正氣所致脾虛等病因治療FD的脾胃氣虛、肝胃不和、脾胃濕熱、脾胃虛弱、寒熱錯雜證,又針對FD各種主證、次證的臨床表現,治療FD的胃脘脹滿、噯氣、納差、胃中灼熱、嘈雜泛酸、脘腹脹痛、口干口苦的病癥,達到病證共治的目的。因此,構建達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物研究用動物模型,應當充分考慮達立通顆粒的組方原則和功效特點,建立病-證-方三者相互關聯的FD動物模型造模方法、檢查指標和評價標準。以下是構建達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物研究用動物模型的一些考慮,供開展相關研究參考。

        一、功能性消化不良診療專家共識意見/指南

        開展達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物的研究,就必須充分了解功能性消化不良相關專家共識意見/指南。目前,最新版的相關專家共識意見/指南如下:

        1、功能性消化不良中醫診療專家共識意見(2017)。

        2、功能性消化不良中西醫結合診療共識意見(2017年)。

        3、西醫合理使用中成藥治療功能性消化不良臨床指南(2020年)。

        以上專家共識意見/指南均推薦達立通顆粒用于治療功能性消化不良。

        二、功能性消化不良的病因病機分析

        西醫對功能性消化不良病因病機的分析

        西醫學上認為FD發病原因較為復雜,確切病因尚未明確,與之相關的致病因素包括胃動力異常、胃酸分泌過多、內臟高敏感性、幽門螺桿菌(HP)感染、遺傳、環境、飲食、生活方式、精神情志、社會生理因素、腦-腸軸異常、腸道菌群失調等。日本學者MOTOYASU等基于“胃動力障礙”病因,提出快速胃排空對比胃排空延緩可能是誘發FD更重要的因素。OSHIMA等“通過灌酸實驗發現FD患者對酸的高敏感性是導致FD癥狀的重要機制,但也有人通過實驗研究提出使用抑酸藥物對FD患者胃排空參數并無大的明顯改變,再次說明FD機制的復雜性。另外,有數據顯示30%~50%的FD患者存在內臟高敏感性,FISCHLER等通過恒壓器測定法臨床實驗發現高敏感性FD患者的焦慮狀態與不適感閾值、痛閾、依從性呈顯著相關,提示FD患者的胃脘疼痛與焦慮和胃高敏有關。根據世界功能性消化不良的羅馬IV標準,對FD的描述強調了心理因素即“令人煩惱的”,而與之相關的腦-腸軸異常學說亦成為當下FD的熱點研究。

        中醫對功能性消化不良病因病機的認知

        中醫文獻中無“功能性消化不良”的表述,根據其臨床表現可將其歸厲到“脹滿”、“痞滿”、“胃痛”等范疇,并辦證分型要為牌胃氣虛、肝胃不和,脾胃濕熱,脾胃虛熱、寒熱錯雜等證,其中肝胃不和是當下臨床最為常見的證型?!饵S帝內經?素間?火元正紀大論》曰:“木郁之發,民病胃脘當心而痛。漢?張仲景《傷塞論》云:“胃中不和,心下痞硬”,可見該病與肝脾胃密切相關。中醫認為脾主升清,胃主降濁,肝主疏泄,三者協調合作共同完成食物的消化吸收和輸布,因此,升降失調是引發該病的主要病因病機。隨著現代中醫學的發展,名醫大家對功能性消化不良的認識也在不斷推陳出新,并提出各自獨到的治法。李乾構認為FD基本病機是脾虛氣滯,特點是本虛標實,本虛主為脾胃虛,標實為痰濕氣郁滯中焦,提出以健脾胃、降逆理氣為主的治法。侯明月等認為脾胃納運是機體氣血化生之源,脾胃不和為FD重要病因,并提出以“通”為主的療法療則。王俊等通過運用統計學的方法從中醫古代書籍里尋找構成FD的病因,發現本病以內因為主,飲食、外寒、情志是構成FD病因的主體,占總病因的87.69%。

        三、功能性消化不良的臨床診斷特點分析

        功能性消化不良的西醫臨床診斷標準

        在判斷與西醫臨床癥狀吻合度時,符合臨床特征、影像檢查、生化檢查①②的賦值11.7%,其余各項賦值5%。

        1、診斷標準

        FD是指來源于胃十二指腸區域,區別于器質性、系統性或代謝性疾病而餐后出現的飽脹不適、早飽感、上腹痛或伴有灼燒不適感的綜合征。依據國際上新頒布的功能性食管胃十二指腸羅馬IV診斷標準,對FD進行界定,分為餐后不適綜合征(PDS)和上腹痛綜合征(EPS),將上述兩種亞型臨床癥狀合并統一,并參照方秀才等翻譯的《羅馬IV功能性腸胃炎》,制定《功能性消化不良臨床診斷標準》,給各項臨床特征進行賦值,量化FD診斷標準。

        2、臨床特征

        (1)餐后飽脹不適

        餐后食物較長時間存在于胃中,出現胃脹而不適的感覺。

        (2)早飽感

        進食較平素量少的食物后即感覺胃飽脹不適,以致不能完成正常進餐。

        (3)上腹痛

        上腹部主觀疼痛和不適的感覺,位于上腹中央劍突下1~2cm至臍上方的范圍。

        (4)上腹灼熱感

        上腹部灼熱不適的主觀感覺。

        (5)上腹脹氣、過度噯氣、惡心。

        (6)燒心不適等癥狀可共存。

        3、檢查

        (1)影像檢查

        ①胃超聲造影檢測胃動力、胃排空率、胃敏感性。

        ②水負荷檢驗配合B超儀判定胃功能障礙。

        (2)生化檢查

        ①胃動素(MTL)、胃泌素(GAS)、神經肽(NPY)等相關胃腸激素降低。

        ②白細胞介素-6(IL-6)升高,白細胞介素-10(IL-10)降低,一氧化氮(NO)水平降低,生長抑素(SS)、5-羥色胺(5-HT)升高及其他一些血清、血漿相關指標異常。

        ③十二指腸嗜酸性粒細胞(EOS)、肥大細胞升高。

        功能性消化不良的中醫診斷標準

        符合主證①胃脘痞悶疼痛;②體態消瘦;③納呆、飲食量低;④口干、飲水量低。符合一項吻合度為15%。

        次證①便溏;②噯氣;③疲乏;④小便短黃;⑤手足不溫;⑥心煩情緒低落;⑦泛吐清水;⑧惡心或嘔吐。符合一項吻合度為5%。

        1、診斷標準

        FD的中醫診斷標準參照《功能性消化不良中醫診療專家共識意見(2017)》。中醫認為,FD病位在胃,與肝脾聯系密切,根據臨床患者的表現共分為脾胃氣滯證、肝胃不和證、牌脾胃濕熱證、脾胃虛弱證、寒熱錯雜證五個證型,根據不同證型以及臨床患者患病程度分為主證和次證。

        2、辨證分型

        (1)脾胃氣虛型

        ①主證

        胃脘痞悶或脹痛;納呆。

        ②次證

        噯氣;疲乏;便溏。

        ③舌脈舌淡,苔薄白;脈細弦。

        (2)肝胃不和證

        ①主證

        胃脘脹滿或疼痛;兩脅脹滿。

        ②次證

        每因情志不暢而發作或加重;心煩;噯氣頻作;善嘆息。

        ③舌脈

        舌淡紅,苔薄白;脈弦。

        (3)脾胃濕熱證

        ①主證

        脘腹痞滿或疼痛;口干或口苦。

        ②次證

        口干不欲飲;納呆;惡心或嘔吐;小便短黃。

        ③舌脈

        舌紅,苔黃厚膩;脈滑。

        (4)脾胃虛弱證

        ①主證

        胃脘隱痛或痞滿;喜溫喜按。

        ②次證

        泛吐清水;食少或納呆;疲乏;手足不溫;便溏。

        ③舌脈

        舌淡,苔白;脈細弱。

        (5)寒熱錯雜證

        ①主證

        胃脘痞滿或疼痛,遇冷加重;口干或口苦。

        ②次證

        納呆;嘈雜;惡心或嘔吐;腸鳴;便溏。

        ③舌脈

        舌淡,苔黃;脈弦細滑。

        四、功能性消化不良動物模型現狀分析

        FD是區別于身體器質性病變的一系列胃部不適癥,發病機制復雜,根據羅馬IV標準,提示FD發病與人的精神情志有著密切聯系。但通過對FD動物模型的現狀分析,發現有關FD的單因素造模方法雖多,卻缺乏對應的模型評價規范,很難滿足藥效評價或臨床前藥理實驗要求。當下各種復合造模方法在逐漸增多,更加重視模擬人體產生該病的多種可能因素,與上述中西醫臨床診療標準匹配模擬的吻合度高,通過對應中西醫臨床診斷標準進行加權平均,構建滿足研究需求的FD動物模型。

        根據中西醫吻合度情況及動物模型評價方法,將目前的FD動物模型分為吻合度高、吻合度一般、吻合度低三個層次。吻合度較高的有:多因子“高脂飼料喂養+番瀉葉湯劑灌胃+束縛+游泳”、雙因子“夾尾刺激聯合灌中藥大黃”,這兩種模擬方法已基本模擬中醫臨床表現癥狀,但相對應西醫診療標準吻合度較低,在此基礎上完善并提高西醫吻合度是今后的目標。一般吻合度的有二因素“灌胃碘乙酰胺聯合小平臺站立”、單因素“束縛”、“夾尾”。低吻合度的有單因素“灌胃碘乙酰胺”、“胃部植入電極”。這些方法都在一定程度上模擬出了FD的病因病機,但均存在或缺乏中醫診斷標準吻合度,或方法片面等問題。

        通過對FD動物模型的分析發現,目前常用的單因素造模方法主要有0.1%碘乙酰胺灌胃法、郭氏夾尾法、束縛法、給予0.5mol/L的冰稀鹽酸灌胃法、人工植入起搏電極模擬FD胃節奏失常五種,其中郭氏夾尾法、束縛法兩種經典法對應的中醫吻合度分別達到50%、65%,且直接涉及到中醫肝郁脾虛的病證特點。但以上單因索造模法無法從整體上體現出FD的疾病特點,對于脾胃氣虛、脾胃濕熱、脾胃虛弱,寒熱錯雜等病證結合的證型需在此模型基礎上進一步改良。劉樂平等團隊創立的"高脂飼料喂養+番瀉葉煎劑灌胃+束縛+游泳"多因素聯用造模法,中醫吻合度高達85%,明顯優于傳統的單因素法和二因素法,其中番瀉葉、大黃等傳統瀉下藥的運用有著不可取代的優勢,基本能夠滿足FD的所有證型。其缺點是干擾因素偏多,若長期不加控制的干預可能誘發模型動物出現抑郁現象,而偏離消化不良的模型。因此,完善FD模型應隨著造模期推進更注重造模因素的合理搭配,增加從病機模擬、病證結合模擬、微環境模擬、細微指標觀察等工作研究,最好能制定一套在造模周期內不同干擾因素的時間部署安排表,在把握多因素造模優勢條件下,控制造模進程,以更加精確的方式模擬人體產生FD的病變過程。

        模型評判標準需涵蓋模型動物的表觀和體內,表觀特征應包括皮膚毛發、行為現象、活躍程度、情緒反應、飲食狀態、飲水狀態、睡眠狀態、大便狀態等,并制定評分標準對其量化分級;體內機制涉及到的胃腸動力異常、內臟高敏感性,需依靠相應的動物儀器檢測分析。實驗者需注意觀察模型動物在造模期喂食進食上時間差異等細微現象,不斷對FD模型標準優化改良,實現FD模型動物實驗的重復性和重現性尤為重要。

        當前,腦-腸軸異常與腸胃病的相關性成為FD研究熱點,多因素誘發的FD動物模型所呈現出的高吻合度與“腦-腸軸互動異?!庇兄鴥仍诘年P聯,基本契合中西醫臨床癥狀,也與羅馬IV標準提到的“令人煩惱的”情志因素相吻合。事實上,動物與人體有很大的差異,例如,臨床上判定指標監測胃腸檢查以探測儀為主,超聲造影儀觀察FD患者胃體前后最大直徑縮小率和胃排空,而動物模型評價是以灌胃法檢測胃排空率、胃敏感性檢測法、胃順應性檢測法、小腸灌胃推進法等,且西醫臨床標準表現出的上腹痛、腹部灼燒感、上腹脹氣、燒心等在動物模型尚不能準確體現,使得臨床與基礎實驗還有很多溝壑。實驗室研究和臨床研究前后的對應性與評判標準還有待科研工作者的思考和驗證。

        五、根據中醫藥理論對達立通顆粒組方的解析

        達立通顆粒是由柴胡、枳實、木香、陳皮、清半夏、蒲公英、焦山楂、焦檳榔、雞矢藤、黨參、延胡索、六神曲(炒)十二味中藥制成的復方制劑,具有清熱解郁,和胃降逆,通利消滯功效,用于肝胃郁熱所致痞滿證,癥見胃脘脹滿、噯氣、納差、胃中灼熱、嘈雜泛酸、脘腹脹痛、口干口苦;動力障礙型功能性消化不良見上述癥狀者。

        針對運動障礙型功能性消化不良病機,治療上宜在通利消滯、和胃降逆的基礎上,佐以清熱解郁之劑。另一方面,本病邪實為患,耗傷正氣,此時若單純運用行氣消導之品,恐重傷脾胃之氣,使正氣日虛,邪氣益盛,故處方設計時應注意到補虛健脾之品的配合。達立通顆粒處方根據古人“腑氣以通為用”的原則,處方中大部分藥味都具有調節胃腸功能、促進消化之功效,而且處方用藥得到現代藥理的支持,治以通利消滯和胃降逆之法,在此基礎上,亦兼顧清熱解郁和扶正之品的運用。

        方中十二味中藥材均為中國藥典收載品種。方中柴胡、枳實為君藥,木香、清半夏、陳皮共為臣藥,蒲公英、六神曲(炒)、焦檳榔、焦山楂、雞矢藤、黨參、延胡索為佐藥。

        柴胡性味苦、平,入心包絡、肝、三焦、膽經。既能輕清升散,又能疏泄,具有舒肝解郁清熱,調理胃腸滯氣的功能,是治肝氣郁結之要藥?!侗窘洝吩疲?/span>“主心腹腸胃中結氣,飲食積聚,寒熱邪氣,推陳致新?!薄侗静輦湟吩疲骸爸麝枤庀孪?,平肝、膽、三焦、包絡相火?!敝T氣機結則滯澀,行則暢通,本品既能舒肝解郁,條暢氣機,又能升舉清陽之氣,最適合肝臟喜條達而主疏泄之本性。

        枳實性味苦、微寒,入脾胃經,有破氣消積,瀉痰除痞之功能。用于飲食不消,胃腸積滯,脘腹脹滿,胸脅痞滿,腹痛便秘,泄痢不暢諸證?!侗窘洝费?“除寒熱結?!薄秳e錄》謂其:“除胸脅痰癖,逐停水,破結實,消脹滿,心下急痞痛?!辫讓嵭衅⑽笟鈾C壅滯,破氣除脹,消積導滯。

        柴胡、枳實共為君藥,一在肝,一在胃。一重在舒肝理氣,一重在和胃行滯,二藥合用,具有理氣行滯、和胃降逆的功能,對肝胃氣滯所致脘腹脹痛大有作用。

        木香性味辛、苦、溫,入脾、大腸經,功善行氣止痛。用于脾胃氣滯,脘腹脹痛等證,凡氣滯諸痛均可用之?!墩渲槟摇分^其:“散滯氣,調諸氣,和胃氣,瀉肺氣?!薄洞竺鞅静荨费灾骸爸涡母挂磺袣?,膀胱冷痛,嘔逆反胃,…健脾消食?!蹦鞠銡馕斗枷?,行氣止痛功效頗佳。此處用之配合君藥用治脅肋脘腹脹滿疼痛。

        清半夏辛、溫,入脾胃經。功善消痞散結,降逆止嘔,燥濕化痰。用于胃氣不和,胸脘痞悶,嘔惡等,有較好和胃降逆止嘔功能?!端幮员静荨氛f:“開胃健脾,止嘔吐?!薄墩渲槟摇分^之:“消胸中痞,膈上痰,除胸寒,和胃氣,燥脾濕?!?/span>

        陳皮辛、苦、溫,入脾、肺經。功善理氣健脾,燥濕化痰。用于脾胃氣滯,脘腹脹滿,惡心嘔吐,消化不良等?!侗窘洝氛f:“主胸中瘕熱逆氣,利水谷,久服去臭,下氣?!薄端幮哉摗分^其:“治胸膈間氣,開胃?!薄侗静菥V目》謂之:“其治百病,總是取其理氣燥濕之功。同補藥則補,同瀉藥則瀉,同升藥則升,同降藥則降。脾乃元氣之母,肺乃攝氣之簽,故橘皮為二經氣分之藥,但隨所配而補瀉升降也?!?/span>

        以上三藥互相配合,具有行氣消痞,降逆和胃之功,輔助君藥理氣暢中而共為臣藥。

        蒲公英,性味苦、甘、寒,入肝胃經。功善清熱解毒,為治肝胃氣痛之良藥。有舒肝解郁,清熱健胃之功?!侗静菪戮帯氛f:“蒲公英亦瀉胃火之藥,但其氣甚平,既能瀉火,又不損土,可以長服久服而無礙”。本方用之,助君臣藥舒肝理氣,清熱解郁。

        六神曲(炒)性味甘、辛,溫。入脾、胃經。消食和胃,用于食積不化,脘悶腹脹,消化不良及瀉泄等癥?!端幮员静荨罚骸盎人奘?,癥結積滯,健脾暖胃?!薄侗静菥V目》謂其:“消食下氣,治痰逆霍亂,泄痢脹滿諸疾?!?/span>

        焦檳榔性味辛、苦、溫。入胃、大腸經。善于行氣消積,用于食積氣滯,脘腹脹痛,大便不爽等癥?!端幮哉摗分^其:“宣利五臟六腑壅滯,破堅蕩氣,下水腫,治心痛,風血積聚?!薄侗静菥V目》謂其:“治泄痢后重,心腹諸痛,大小便氣秘?!?/span>

        焦山楂性味酸、甘,微溫。入脾、胃、肝經。功善消食化積、散瘀行滯,有助脾健胃,促進消化之功,用于食積停滯,油膩肉積,腹痛瀉泄等癥?!度沼帽静荨?/span>:“消食積補脾?!薄侗静菅芰x補遺》謂其:“健胃行結氣?!薄侗静菥V目》曰:“化飲食,消肉積癥瘕,痰飲痞滿,吞酸,滯血脹痛?!?/span>

        雞矢藤性味甘、酸,平?;钛?、散瘀、止痛,消食導滯,除濕消腫、解毒。用于脘腹疼痛,食少腹瀉痢疾等癥?!恫菽颈惴健?/span>:“補虛癆,調理脾胃元氣?!薄墩渲槟摇罚骸俺凉褚鏆?,和中補陽,消痰除水,生津止渴,止瀉痢,……得枳實消脾滿氣分?!薄吨貞c草藥》謂其:“健脾除濕,益氣補虛?!?/span>

        以上五藥共助君臣藥助脾健胃,助運暢中。

        延胡索性味辛、苦,溫。入脾、肝經。功善活血、散瘀、理氣、止痛,凡氣滯血瘀引起的胸腹諸痛均可使用。尤其胃脘脅痛,最為適宜?!独坠诰恼摗罚?/span>“治心痛欲死?!薄夺t學啟源》謂其:“治脾胃氣結滯不散,主虛勞冷瀉,心腹痛,下氣消食?!薄毒V目》:“活血、利氣、止痛、利小便?!北酒分妓幮袣庵雇?。同時久痛入絡,氣滯亦可導致血行瘀阻,故延胡索又能行血散瘀,以消瘀滯,治療兼證。

        黨參性味甘,平。入脾、肺經,補中益氣。用于脾胃虛弱,氣虛不足,脾虛食少,倦怠乏力等癥?!侗静輳男隆罚?/span>“主補中益氣,和脾胃,除煩渴,中氣微弱,用之調補,甚為平妥”?!侗静菡x》謂其:“力能補脾養胃,潤肺生津,健運中氣,…其尤可貴者,則健脾運而不燥,滋胃陰而不濕,潤肺而不犯寒涼,養血而不偏滋膩,鼓舞清陽,振動中氣,而無剛燥之弊?!?/span>

        本證肝胃氣滯,中滿不消,然行氣消導之劑用多恐傷正氣,故用小量黨參固護脾胃之氣,以達到祛邪兼顧正氣,驅邪而不傷正之目的。

        以上七味藥,共助君臣藥舒肝和胃,行氣止痛、清熱解郁,共為佐助。

        以上諸藥的歸經均與肝、脾、胃經有關,故不再另設引經使藥。

        諸藥配合,共奏清熱解郁,通利消滯,和胃降逆之功,使肝氣條達舒暢,胃得通降,諸證皆除。

        六、達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物研究用動物模型的構建

        依據中醫理論、FD病因學和病機學理論、達立通顆粒治療FD的特點,構建基于病因、與臨床癥狀高度吻合、符合臨床診斷標準、病證結合、充分體現病-證-方三者關系、穩定可靠、重現性良好的達立通顆粒治療功能性消化不良藥效化學和生物標志物研究用動物模型,建立相關模型動物檢查指標體系和評價標準,以利于相關研究的順利推進。

        根據以上達立通顆粒相關研究對模型動物的要求,擬采用“碘乙酰胺灌胃+小平臺站立+飲食不節+夾尾刺激”多因素復合法構建FD動物模型,建立模型動物檢查指標體系和評價標準,供開展相關研究參考。

        用于達立通顆粒藥效化學和生物標志物研究的功能性消化不良動物模型制備方法

        1、動物

        選擇SD品系或Wistar品系大鼠。

        2、模型

        采用“碘乙酰胺灌胃+小平臺站立+飲食不節+夾尾刺激”多因素復合法制備FD動物模型。

        3、依據

        雖然FD的發病機制尚未完全明確,但研究發現,內臟高敏感性、胃腸動力障礙、胃電節律失常是FD發病的主要病理機制;抑郁/焦慮、飲食不節是誘發FD的主要因素。針對達立通顆粒治療FD的特點,采用“碘乙酰胺灌胃+小平臺站立+飲食不節+夾尾刺激”多因素復合法制備FD動物模型,既考慮了FD的主要病理機制,由考慮了FD發病的主要因素,可以復制出FD的多個臨床癥狀,與臨床的吻合度較高。

        目前,碘乙酰胺灌胃法是國際上公認的FD造模方法。碘乙酰胺是蛋白組學中半胱氨酸和組氨酸的烷基化試劑,可抑制蛋白酶活力下降甚至消失而不使蛋白變性,具有誘導細胞缺氧、黏膜損傷、焦慮和抑郁作用,可模擬FD的病理生理機制,應用碘乙酰胺造模法可模擬出FD患者胃敏感增高的病理表現,故此法在國際上比較常用。

        小平臺站立法不但可以使大鼠疲勞致脾虛,還可以加重大鼠的恐懼心理,很好地模擬FD精神情志致病的病因和病理病機。

        夾尾刺激法是用夾尾激怒大鼠造成FD肝郁模型,是國內學者制備FD動物模型最常用的方法。

        飲食不節法是給大鼠不規則喂養,單號正常進餐,雙號禁食不禁水,以打亂大鼠的正常飲食規律,使大鼠的胃電節律失常,造成FD動物模型。

        4、方法

        取出生7天的健康雄性SD大鼠(幼鼠)與母鼠同籠飼養,母鼠給予全價顆粒飼料進行喂養,適應3天至幼鼠出生后第10天,給幼鼠灌胃0.1%蔗糖碘乙酰胺溶液,每只每天0.2ml,連續6天;至幼鼠出生后第22天,將經碘乙酰胺處理的幼鼠與母鼠分籠,全價顆粒飼料喂養;至幼鼠出生后第43天,將經碘乙酰胺處理的幼鼠進行小平臺站立法處理小平臺站立箱是在110cm×60cm×40cm長方形水槽中固定15個直徑6.5cm、高10.0cm的小平臺。向小平臺站立箱水槽注水,水溫控制在22℃±2℃,注水量以水面達到小平臺臺面下2.0cm為宜。大鼠在小平臺上可以自由活動,一旦進入睡眠狀態就會因為肌肉舒張、松弛而落入水中,不能休息,以此造成大鼠勞倦。每日17:00~次日7:00進行小平臺站立,持續14小時,連續21天;在大鼠不站立小平臺期間,于每日12:00用長海綿鉗夾大鼠尾巴遠端1/3處,以不破皮為度,令其暴怒,每次刺激30分鐘,每日一次,連續21天;在此期間,單號給予大鼠正常進餐,雙號禁食不禁水,連續21天,使大鼠飲食不節。造成FD動物模型。

        5、檢查

        對上述方法造成的FD模型動物進行一般狀態、行為狀態、組織病理學、胃電圖、胃腸動力、胃排空率、胃敏感性、胃功能、生化等檢查。

        (1)一般狀態檢查

        一般狀態檢查包括模型大鼠的皮毛、排泄物、分泌物、進食量、飲水量、體重等。

        (2)行為狀態檢查

        行為狀態檢查包括模型大鼠的活躍程度、情緒反應、興奮程度、睡眠狀態、行走姿態、抓力測定等。

        (3)組織病理學檢查

        組織病理學檢查主要是觀察模型大鼠的消化道組織形態學情況。

        (4)胃電圖檢查

        胃電圖檢查主要是觀察模型大鼠胃電慢波的振幅和頻率情況。

        (5)胃排空率檢查

        采用胃內容物稱量方法檢查模型大鼠的胃排空率。

        (6)小腸推進率檢查

        采用炭末推進法檢查模型大鼠的小腸推進率。

        (7)胃腸收縮力檢查

        采用離體、在體模型大鼠的胃、腸平滑肌,檢查其收縮力。

        (8)胃敏感性檢查

        采用內臟刺激器檢查模型大鼠的胃敏感性。

        (9)胃功能障礙檢查

        采用水負荷檢驗配合B超檢查模型大鼠的胃功能障礙情況。

        (10)生化檢查

        檢查模型大鼠的胃動素、胃泌素、神經肽、白細胞介素-6、白細胞介素-10、一氧化氮、生長抑素、5-羥色胺、十二指腸嗜酸性粒細胞和肥大細胞、尿D木糖醇、血清乳酸值等。

        6、評價

        FD動物模型必須符合兩個基本要求:一是該模型動物應具有消化不良的癥候,食欲不振或飲食量明顯減少;二是該模型動物無其他器質性病變。

        在滿足以上兩個基本要求的前提下,根據與臨床的吻合度、病-證結合度、病-證-方關聯度、主要指標、次要指標的權重,以及模型的穩定性和可重現性等,對FD動物模型進行綜合評分,根據評分結果對模型進行評價。

        采用以上評價良好的FD模型動物,開展達立通顆粒藥效化學和生物標志物研究,根據達立通顆粒試驗組與模型動物組、溶劑空白對照組、莫沙必利對照組相關指標綜合評分結果的比較,評價達立通顆粒治療FD的療效,探討其產生藥效作用的化學和生物標志物。

         


        文獻資料

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        2、中國中西醫結合學會消化系統疾病專業委員會,功能性消化不良中西醫結合診療共識意見(2017年),中國中西醫結合消化雜志,2017,25(12)889~894

        3、中華醫學會消化病學分會胃腸功能性疾病協作組  中華中醫學會脾胃病分會,西醫合理使用中成藥治療功能性消化不良臨床指南,中華消化雜志,2020,40(2)83~86

        4、呂林等,功能性消化不良動物模型方法分析,中國中西醫結合雜志,2016,36(11)1378~1380

        5、康楠等,功能性消化不良以及病證結合動物模型造模方法研究進展,北京中醫藥,2015,34(3)249~252

        6、劉艷陽等,內臟敏感性增高型功能性消化不良脾虛證動物模型研究的思路與方法,現代中醫臨床,2015,22(2)29~31

        7、呂林等,胃腸動力障礙功能性消化不良動物模型的建立,中國中西醫結合雜志,2017,37(8)944~949

        8、郭海軍等,功能性消化不良的動物模型研究,中國中西醫結合消化雜志,2000,9(3)141~142

        9、朱潔等,新型造模法制備功能性消化不良肝郁脾虛證大鼠模型,湖南中醫藥大學學報,2018,38(4)372~375

        10、盧鵬飛等,基于中西醫臨床病證特點的功能性消化不良動物模型分析,中國實驗方劑學雜志,2020,26(18)210~215

        11、石敬依等,基于中醫證型的功能性消化不良動物模型的研究進展,現代中西醫結合雜志,2021,30(17)1923~1927

        12、胥文娟等,消化系統病證結合動物模型的研究進展及中醫藥靶點干預,中國實驗方劑學雜志,2022,28(19)258~266

        13、吳震宇等,簡述功能性消化不良動物模型的建立與評價方法,世界華人消化雜志,2015,23(32)5190~5195

        14、郭晟等,達立通顆粒治療功能性消化不良作用機理研究,中國藥物評價,2018,35(3)183~189

        15、田碩等,基于臨床中西醫病癥特點的中醫藥動物模型評價新方法,中藥藥理與臨床,2017,33(6)165~169

        16、陶睿智等,功能性消化不良動物模型的研究進展,中國實驗動物學報,2022,30(2)283~290

         

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